Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型白血病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现人体内自身病原体到显现1同型肾病针灸病征的十分困难数万人在老年人以前就有很好的刻画，多个人体内自身病原体乙型肝炎的老年人当中有70%在人体内转换后10年内患上肾病，而随访15年的老年人这一数目减低到84%。比较来说之下，占针灸1同型肾病一半以上的同型1同型肾病的胃癌机制还很难给与充分的科学研究。

越来越多的人开始用作分期系统来判别1同型肾病的十分困难：变异在显现多种人体内自身病原体时进入第1收尾，显现皮质醇异常时进入第2收尾，显现病征时进入第3收尾。一些多发人体内自身病原体乙型肝炎的变异，在1期和2期，十分困难更慢，并持续发展为胃癌的1同型肾病。我们以后刻画了一一组在首次验证到多种人体内自身病原体样本后至少10年无肾病的却是慢十分困难者，这一组病患者人数少，但特质非常恰当。随后，我们发现人体内自身复合物特异性CD8+T细胞会催化在十分困难比更慢的病患者当中整体不值得注意，但在近期胃癌和长年值得注意的肾病病患者当中很较易验证到。这可能表明，与十分困难病患者比较来说，这些病患者自身免疫催化的抑制增强。

早期科学研究表明，尽管抑制性T细胞会(Treg)数量正常，但肾病病患者值得注意一些机能缺陷，其当中都有对IL-2的催化能力减缓。此外，肾病病患者当中的物理现象CD4+T细胞会可能对抑制更具抵抗性，表现为物理现象T细胞会的减缓减弱，自然转化成的Treg和胃转化成的可借Treg，以及复合物经历的CD4+T细胞会当中IL-2催化减弱。本科学研究的目的是刻画了CD4+抑制性T细胞会(Treg)在一小群却是比更慢十分困难者当中的特质，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访一段时间为18-32年。

步骤：BOX科学研究是一项以变异为基础的交叉科学研究，在21岁以下确诊的病患者亲属当中检查1同型肾病的危险因素。我们以后刻画了长年比更慢十分困难者的特质，他们保持多重人体内自身病原体乙型肝炎超过10年，但很难显现肾病的针灸病征，慢性或非同步进行性自身免疫。随后，10名继续保持无肾病并愿意提供大量血液样本的比更慢十分困难者纳入T和B细胞会机能科学研究。在目前的科学研究当中，8名慢十分困难者(SP一组)，当中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁密切关系的人体内自身病原体乙型肝炎。所有的行动者都处于1同型肾病十分困难的1期，尽管一些人随后失去了人体内自身病原体对某些复合物的乙型肝炎催化，然而，一名病患者已经处于2期至少6年，但很难显现针灸病征，一名病患者被诊断为肾病，该受试者72岁，在采集实验样本时，其HbA1c急剧下降到53 mmol/mol(7%)，在数据科学研究当中对该小分弟同步进行了直接分析报告。分离外周血单个核细胞会(PBMCs)，采用多参数流式细胞会术和T细胞会减缓试验分析报告小分弟当中Treg的阈值、表同型和机能。用作FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、也就是说和回归)同步进行无监督聚类科学研究，分析报告Treg表同型。

结果：与肥胖症小分弟比较来说，来自慢十分困难体的潜意识CD4+T细胞会的监督聚类推测，启动时的潜意识CD4+ Treg阈值减低，与糖皮质激素可借的TNFR方面蛋白(GITR)表示减低有关。一名HbA1c急剧下降的病患者与十分困难比更慢者和最简单的相符合一组比较来说，Treg谱有所各不相同。机能科学研究表明，与肥胖症小分弟比较来说，来自比更慢十分困难体的Treg介导的CD4+物理现象T细胞会减缓相比破损。表现为对物理现象CD4+T细胞会CD25和CD134表示的减缓减低。

示意图1 深入的表同型科学研究推测，CD4+Treg亚同型在慢十分困难链表当中减低。由FlowSOM降解的Treg一楼，聚集在来自所有小分弟的光阴CD4+CD45RA -细胞会上。根据标记物表示鉴定出有10个元簇:潜意识T细胞会_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;潜意识T cell_4;CD49b潜意识T细胞会;HLA-DR + GITR +潜意识T细胞会;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)用作9个各不相同Treg标记降解的10个元簇的MST。每个节点代表人一个集群(100个集群)，更大的元集群(10个元集群)在节点一组四周上色。每个节点当中的饼示意图对此单个标记的表示高至。(b)每个元聚类的热示意图，以推测整体标记表示。(c, d)为HD一组(c)和SP一组(d)降解示意图，以及FlowSOM定位的每个元簇的很薄。(e-l)比较丰度为每个metacluster罐等分(丰度> 0.05%)确切为HD和SP一组:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +潜意识T细胞会(h)、潜意识T cell_1(i),潜意识T cell_2 (j),潜意识T cell_3 (k) n d CD49b潜意识T细胞会(l)。粉红色圆圈代表人**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon一组小写秩检验。此键适用于示意图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

示意图2 用作CITRUS的预测模同型证实，Treg阈值的减低是十分困难比更慢的标志。分级门控(a - f)和玉米科学研究(g-k)尤其SP行动者和最简单的HD行动者在CD4+CD45RA−T细胞会上的差异。(a)流感病毒CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l变异的代表人性示意图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表示同步进行分离，模拟FlowSOM变异。(b) HD(白斑)和SP(蓝点)一组以及小分弟SP 606(粉红色)当中CD25+ cd127的阈值简介示意图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控集合的罐等分;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)玉米簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表示气压着色，箭头突出有的簇被定位为SP和HD链表密切关系的各不相同。(j)罐等分推测了在SP(蓝点)和HD(灰点)一组当中，CITRUS潜意识Treg_3和Treg_4的比较丰度(数目)。(k)灰度推测每个簇的表同型(粉红色)和Treg标记比较表示与背景表示(金色);上列，闪存Treg_3;下面一行，闪存Treg_4。背景与所有其他簇当中标记的表示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon一组小写秩检验

示意图3 与肥胖症献血者比较来说，十分困难比更慢者潜意识treg的GITR减低。每个潜意识CD4+T细胞会元簇(潜意识T细胞会_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;CD49b +潜意识T细胞会;HLA-DR + GITR +潜意识T细胞会;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)验证每个表示标记的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)链表的表示热示意图(sp606不都有在内)。(c,d)潜意识Treg_4元簇当中所有HD(灰色)、所有SP(金色)和SP 606(粉红色)的FlowSOM GITR表示串联，推测灰度(c)和简介示意图(d)。Wilcoxon一组小写秩和检验，p< 0.07(粉红色)所有小分弟都有，p< 0.05(金色)小分弟SP 606和最简单的HD不都有在测试当中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs当中GITR表示，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(金色)和SP 606(粉红色)串联，推测灰度(e)和简介示意图(f) *p< 0.05, Wilcoxon一组小写秩检验

示意图4 来自比更慢十分困难的CD4+ treg细胞会控制物理现象CD4+T细胞会的能力减缓。SP一组用金色的支线和圆圈对此，HD一组用紫色的支线和圆圈对此，粉红色的支线/圆圈对此小分弟sp606。用作CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会同步进行分选。CD4+CD25−(此番者)被标记为CFSE, Treg按观察的数目滴定。用抗CD3 /28微珠酪氨酸细胞会，人才3在此之后同步进行流式细胞会术验证。(a-d)与CD4+此番者比较应的treg人才(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD此番者人才。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE减缓百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的减缓百分比。用作乙型肝炎相符合(启动时的拥护细胞会不含treg)推算减缓百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差科学研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重尤其测试

示意图5 物理现象CD4+T细胞会对比更慢十分困难的T细胞会酪氨酸的减缓更极端。SP一组用金色的支线和圆圈对此，HD一组用紫色的支线和圆圈对此，粉红色的支线/圆圈对此小分弟sp606。用作CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会同步进行分选。CD4+CD25−(此番者)被cfsel标记，treg按观察的数目滴定。用抗CD3 /28微珠酪氨酸细胞会，人才3在此之后同步进行流式细胞会术(CD25反染)和细胞会因弟科学研究。HD Treg与HD、SP或sp606此番者共同人才。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE减缓百分数万人(b)。(c,d) CD25减缓百分数万人(c)和CD134减缓百分数万人(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才当中的表示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差科学研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重尤其测试

论断：我们得出有的论断是，来自比更慢十分困难弟的酪氨酸潜意识CD4+Treg在GITR表示当中给与了适配和丰富，强调了进一步科学研究Treg在1同型肾病风险变异当中的异质性的必要性。

文中出有处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28